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液相色谱柱的清洗再生没你想的那么难!

发布时间:2019-10-10浏览次数:1445返回列表

    通常情况下,对于常用的反相色谱柱,如果出现了严重的柱效降低,需要考虑清洗再生,建议大家用以下流程来进行冲洗:
    冲洗流程:
    20倍柱体积水:乙腈= 95%:5% (用于移除系统中缓冲盐,可根据常用缓冲盐浓度调整比例)
    20倍柱体积 乙腈
    5倍柱体积 异丙醇
    20倍柱体积 正己烷
    5倍柱体积 异丙醇
    20倍柱体积 乙腈
    20倍柱体积 水:乙腈=95%:5% (可与步骤1保持相同的比例)
    用所需的流动相比例重新平衡色谱柱
    关于色谱柱的再生,我相信大家能看到很多相关文章,建议大家可以根据实际需求来选择再生条件。
    今天要和大家讲的是关于上文给出的条件中柱体积的问题。
    实际上在色谱柱冲洗时,很多实验室习惯用冲洗时间来评价是不是达到我们想要的效果。例如某位师傅告诉你把这个柱子冲半个小时就可以了。
    然而色谱柱的冲洗应该使用冲洗的溶剂体积来评价冲洗效果。例如上文中提到的5倍柱体积异丙醇,20倍柱体积的乙腈等,这些柱体积指什么呢?
    其实柱体积需要按照你使用的色谱柱的内径和柱长来计算。
    通过公式就很容易算出柱体积了,例如一根4.6mm内径,150 mm柱长的色谱柱柱体积为:
    如果要用20倍柱体积的乙腈冲洗色谱柱就需要约34mL的乙腈,假设你的柱流量是1mL/min,那就要用乙腈冲洗34分钟。
    当柱流量是1.5 mL/min时就需要用乙腈冲洗约23分钟。
    不知道这样的解释大家能理解么?
    zui后提醒大家,冲洗色谱柱时,色谱柱的尾端不要接检测器,接一个可以收纳废液的容器就行了。


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